人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

1． 采用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKit水平。

2. 首先用純化的人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKit抗體包被微孔板，制成固相抗體。

3. 然后往包被單抗的微孔中依次加入穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKit，再與HRP標(biāo)記的穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKitt抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成    藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。

4. 顏色的深淺和樣品中的穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKit呈正相關(guān)。

5.  zui后用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKit濃度

。

目的：測(cè)定人的血清，血漿及相關(guān)液體樣本中穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISAKit的含量。

5. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。

6. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）去除顆粒。仔細(xì)收集上清，如有沉淀，再次離心。

安全性：
1． 避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。

4   Elisa試劑盒請(qǐng)遠(yuǎn)離兒童

自備物品：

1 、 37 ℃ 恒溫箱

2 、 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3 、 精密移液器及一次性吸頭

4 、 蒸餾水

5 、 一次性試管

6 、 吸水紙

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

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