培養(yǎng)基配方

常用培養(yǎng)基

（1）血液瓊脂（血平板）：

   【配方一】    

   成分：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂90rot；脫纖維羊血(或兔血)10ml。

   制法：將已滅菌的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂(pH7.6>加熱融化；冷卻至50℃左右，以無(wú)菌手續(xù)加入10ml脫纖維羊血（臨用前置37℃水浴箱預(yù)溫），輕輕搖勻（勿使有氣泡），傾注于滅菌平皿內(nèi)，每一平皿(直徑9 cm)13～15ml或分裝試管，制成斜面；待凝固后，抽樣置37℃培養(yǎng)18～24h，觀(guān)察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；如無(wú)菌生長(zhǎng)，置4℃?zhèn)溆谩?/span>

   【配方二】

   成分：肉膏湯(pH7.8)800ml；硫酸鎂(493g/L)8 ml；脫纖維羊血80ml；瓊脂21～23g；5.0g/L對(duì)氨基ben甲酸8ml。

   制法：將肉膏湯置三角燒瓶?jī)?nèi)，加入硫酸鎂、對(duì)氨基ben甲酸及瓊脂，混合并使液體浸濕瓊脂，121.3℃高壓滅菌30分鐘，取出冷至50℃左右，以無(wú)菌手續(xù)加入37℃水浴預(yù)溫的無(wú)菌脫纖維羊血或兔血，輕輕搖勻，傾注平板，凝固后，抽樣置37℃培養(yǎng)18～24h，如無(wú)菌生長(zhǎng)冷藏備用。

（2）巧克力色血瓊脂（巧克力平板）：

   成分：與血瓊脂配方相同。

   制法：與血瓊脂相同，但于培養(yǎng)基中加入血液混勻后，須再置85℃水浴10～15分鐘，使血液的顏色由鮮紅轉(zhuǎn)變?yōu)榍煽肆ι蝗〕霾⒗渲?/span>50℃左右，傾注平板，經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)后存4℃?zhèn)溆谩?/span>

（3）麥康凱瓊脂：分離腸道桿菌用。

   成分：蛋白胨20g；乳糖10g；10g/L的中性紅水溶液5ml；氯化鈉5g；瓊脂20一25g；膽鹽5g（或牛膽酸鈉4g與去氧膽酸鈉1g），加蒸餾水1000ml。

   制法：將蛋白胨、氯化鈉、膽鹽及乳糖加于500ml蒸餾水中加熱溶解；將瓊脂加于余下的500ml蒸餾水中加熱溶解；將上述兩液趁熱混合，調(diào)整pH至7.4，以絨布過(guò)濾，按每瓶100ml分裝，115.6℃高壓滅菌20分鐘，待冷卻至50～60℃時(shí)，每100ml培養(yǎng)基中加入經(jīng)煮沸滅菌的10g/L中性紅溶液0.5ml，混合后傾注平板。

  注意事項(xiàng)：膽鹽能抑制部分非病原菌及革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的生長(zhǎng)，但能促進(jìn)某些革蘭氏陰性病原菌的生長(zhǎng)；因含有乳糖及中性紅指示劑，故分解乳糖的細(xì)菌（如大腸桿菌），菌落呈紅色；不分解乳糖的細(xì)菌，菌落不呈紅色。

（4）伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)：分離腸道桿菌用。

   成分：肉膏湯瓊脂(pH7.4)100ml；20g/L的伊紅水溶液(滅菌)2ml；乳糖1g；6g/L的美藍(lán)水溶液(滅菌)1mI。

   制法：加熱溶化已滅菌的肉膏湯瓊脂，加入乳糖1g；待冷至50℃左右，加入伊紅及美藍(lán)溶液，混勻傾注平板，凝固后備用。

（5）羅氏培養(yǎng)基：分離結(jié)核桿菌用。

   成分：磷酸二氫鉀(無(wú)水)0.96g；天門(mén)冬酰胺(天門(mén)冬素)0.72g；枸櫞酸鎂0.12g；硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.048g；純甘油(中性)2.4ml；蒸餾水120ml；馬鈴薯粉6.0g，新鮮雞蛋6～8個(gè)；10g/L的孔雀綠溶液8ml。

   制法：將磷酸二氫鉀至純甘油的各成份混合，置沸水中加熱溶解，加入馬鈴薯粉，邊加邊攪拌，注意勿結(jié)成塊，并繼續(xù)在沸水浴中加熱半小時(shí)，時(shí)加攪拌，待冷至65℃時(shí)加入全蛋液200ral及10g/L孔雀綠溶液8ml，充分混勻，分裝于無(wú)菌試管，每管約5～6ml，塞上橡皮塞；置血清凝固器內(nèi)經(jīng)90℃1h，制成斜面。

（6）沙保弱氏培養(yǎng)基：培養(yǎng)真菌用。

   成分：蛋白胨10g；葡萄糖40g；瓊脂20g；蒸餾水1000ml。

   制法：上述成份混合加熱溶解（一般可不校正pH），分裝試管，121.3℃高壓滅菌15分鐘，趁熱制成斜面。如不加瓊脂即為沙保弱氏液體培養(yǎng)基。

（7）葡萄糖肉湯：用于增菌。

   成分：酵母浸膏3g，構(gòu)櫞酸鈉3g；牛肉湯1000ml；247g/L硫酸鎂20ml；葡萄糖3g；磷酸氫二鉀2g；5g/L對(duì)氨基ben甲酸5ml。

   制法：除葡萄糖及硫酸鎂外，其他各物混和，加熱溶解，校正pH至7.6，再煮沸5分鐘，用濾紙過(guò)濾并分裝于100ml三角燒瓶中，每瓶50ml，包扎瓶口，121.3℃高壓滅菌15分鐘；將葡萄糖配成100g/L的水溶液，硫酸鎂配成247g/L的水溶液，分別高壓滅菌（葡萄糖為113℃）15分鐘，于每50ral、無(wú)菌肉湯內(nèi)加入滅菌葡萄糖及硫酸鎂水溶液各1ml混勻，于37℃培養(yǎng)48h。證明無(wú)菌生長(zhǎng)后存于4℃?zhèn)溆谩?/span>

（8）解脲支原體培養(yǎng)基：

 成分：牛肉浸液70ml；蛋白胨1.0g；NaCl 0.5g；KH2PO4 0.15g；4.0g/L酚紅0.5mI。

 制法：調(diào)pH至6.0，加熱融化后濾紙過(guò)濾，121.3℃高壓滅菌，無(wú)菌加入小牛血清20ral；250g/L鮮酵母浸液10ml；青霉素20萬(wàn)單位；400g/L尿素（G3濾器過(guò)濾除菌）0.5ml，分裝試管，每管4ml。如傾注平板，將上述液體培養(yǎng)基中加入瓊脂粉1.0g。

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