酵母蛋白抽提試劑盒說明書

Yeast Protein Extraction Kit

目錄號：K0890   

保存：蛋白酶抑制劑混合物：-20℃

    其它組分：室溫  

組分說明

Catalog no.                   K0890       K0890A

Kit Size                         25  次       100 次

Yeast Protein Extraction Reagent         25 ml       100 ml

蛋白酶抑制劑混合物                  250μl        1 ml

產(chǎn)品簡介

    酵母蛋白抽提試劑用于從酵母細(xì)胞中快速，高效而溫和地抽提可溶性蛋白。采用試劑處理，可以避免激烈的機械處理造成的氧化和熱度升高對目的蛋白的破壞作用。使用方便，避免了重復(fù)性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對酵母細(xì)胞的破壞。本抽提試劑可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌及革蘭氏陽性菌的蛋白抽提。與傳統(tǒng)方法相比，

處理得到的提取液中可溶蛋白產(chǎn)量大，活性高，提取快速；提取液可以直接用于 Ni-NTA  、GST 等親和純化。酵母蛋白抽提試劑盒中帶有蛋白酶抑制劑混合物，可有效避免蛋白提取過程中蛋白的降解。

注意事項

 1. 提取液中含有去污劑，不宜使用受去污劑干擾的蛋白定量方法。

 2. 為了獲得實驗j效果，請根據(jù)實驗調(diào)整Z佳使用量。

 3. 本產(chǎn)品僅用于科研。

操作步驟  

 1.  酵母培養(yǎng)液3000 xg，4℃，離心5分鐘（離心后馬上抽提或置于-20℃或-80℃保存）。

 2.  請在蛋白抽提前取出實驗所需蛋白抽提試劑進(jìn)行預(yù)冷，  按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物（例如990μl抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物），使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意：在進(jìn)行蛋白抽提前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3.  按照每50 mg酵母加入500  μl酵母蛋白抽提試劑加入抽提液，渦旋振蕩或上下吸打使酵母充分重懸。

 4.  將細(xì)胞懸液置于冰上，孵育20分鐘（每間隔幾分鐘輕微搖晃一下）。

 5.  12,000 rpm（13,400 xg）離心10分鐘取上清（可提取超過90%的可溶性蛋白，如有需要，可將沉淀進(jìn)行第二次蛋白抽提）。

 6.  上清可進(jìn)行下一步的蛋白含量測定、純化及分析。

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